ELISA試劑盒實驗的一般步驟
ELISA試劑盒是繼免疫熒光和放射免疫技能之后發展起來的一種免疫酶技能。它是以免疫學反應為根底,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種靈敏性很高的試驗技能。以下是對ELISA試驗的通用過程的簡略闡明。
ELISA試劑盒試驗通用過程:
(1)、要確保移液槍的精確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行判定。如果有專業人員進行糾正更好。
(2)、要裝備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。提取不相同的液體后,要更換槍頭。即使是提取規范品時也相同。要在試驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都康復到室溫,以使作用更安穩。
(3)、試驗時,要使底物避光儲存。
(4)、用槍提取液體時速度不能太快,防止生成氣泡而使提取量不精確。
(5)、提取液體時,要用量程和需要量附近的槍去吸,減小誤差數值。
(6)、將液體加到酶標孔中時,防止槍頭和孔內液體觸摸,可使槍頭上的液滴和孔壁觸摸,液滴會天然流下去。
(7)、液體悉數加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕搖晃30秒,是液體平緩均勻。也可以用酶標儀的晃動功用。
(8)、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸騰。
(9)、洗板時,每次洗液參加后,應靜置1分鐘,使清洗愈加完全。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
(10)、洗液不行時,可用蒸餾水自行制造PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,參加0.1%的吐溫20作為洗液。參加1/1000的疊氮鈉后可長時刻保存。
(11)、底物是光靈敏的,需要在臨用前現配。
(12)、檢測前,要翻開酶標儀,使之穩定10分鐘以上。
(13)、底物有必定的毒性,間斷液對皮膚有腐蝕性,應盡量防止觸摸。
(14)、待檢樣品要弄清,否則會影響作用的精確性。
(15)、溫浴時刻應遵從試劑盒規則。
(16)、應盡量做雙孔試驗,這樣才調確保數據的精確性。
(17)、ELISA試劑盒對作用有疑問的樣品要用其它辦法進行確證。