ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的許多長處，在試驗(yàn)室的應(yīng)用現(xiàn)已適當(dāng)普及，絕大多數(shù)是用于檢測不知道樣本中抗原的濃度。現(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口，數(shù)量繁復(fù)令人目不暇接，并且質(zhì)量也是良莠不齊，那么咱們怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢？首先要依據(jù)咱們所要檢測的分子進(jìn)行檢測，除此以外也還有一些需求加以考量的要素，下面就為咱們供給幾點(diǎn)參考。

1. 試驗(yàn)類型

ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個(gè)一起特色，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特別的類型，In-cell ELISA需求將微孔板中培育的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培育細(xì)胞，然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原構(gòu)成斑點(diǎn)。此外，咱們還需求依據(jù)本身需求挑選96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA試驗(yàn)。

一般人們運(yùn)用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種辦法既靈敏又有用，受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是*挑選，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或許抗體只要一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下，競賽性ELISA就更為適用，這種辦法是選用帶符號的純化抗原與樣本中無符號的抗原進(jìn)行競賽，以結(jié)合捕獲抗體。

2. 抗體類型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合作用更好。例如，關(guān)于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有協(xié)助。多抗能夠保證捕獲一切抗原，隨后單抗再特異性檢測具有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有考究。咱們不期望捕獲抗體與檢測抗體競賽抗原上的同一位點(diǎn)，為此咱們就需求保證捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在堆疊。假如捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會對試驗(yàn)成果發(fā)生較大影響。要防止這一問題，咱們能夠挑選購買“matched pair"的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才引薦的好組合。

3. 穿插反響

假如抗體間發(fā)生沖突或穿插反響就會影響整個(gè)試驗(yàn)的特異性。其間抗體來歷所帶來的兼容性就是穿插反響的一個(gè)要素。雖然現(xiàn)在購買源自指定動(dòng)物的抗體越來越容易，咱們?nèi)杂斜匾姓J(rèn)一下是否會發(fā)生穿插反響的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時(shí)，檢測用的二抗有必要特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反響。假如檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，試驗(yàn)特異性就會大打折扣。一般咱們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來防止上述問題。

與此同時(shí)，了解試劑盒中供給的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），避免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測成果收到影響。

4. 檢測方法

現(xiàn)在檢測ELISA有許多途徑，咱們能夠依據(jù)自己的偏好進(jìn)行挑選。一般ELISA檢測的是酶促反響的可溶性產(chǎn)品，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如一般運(yùn)用的辣根過氧化物酶HRP），而反響系統(tǒng)中增加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反響生成具有特征性的色彩，能夠經(jīng)過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶能夠結(jié)合在一抗上，ELISA試劑盒也能夠結(jié)合在二抗上，還能夠運(yùn)用鏈霉親和素符號的酶與親和素符號的一抗結(jié)合。此外ELISA的成果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。